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          NEB T4 DNA連接酶(Ligase)介紹

           更新時間:2023-06-13 點擊量:6000

          NEB T4 DNA連接酶(Ligase)將連接以下底物:

          image.png

          NEB T4 DNA連接酶(Ligase)的特性和用法:

          濃度:400000個內聚端基單位/ml和2000000個內聚端基單位/ml

          反應條件:1X T4 DNA連接酶反應緩沖液;在16°C條件下培養。

          1X T4 DNA連接酶反應緩沖液:50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mM ATP、10 mM DTT(pH 7.5 @ 25°C)。

          貯存溶液:10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% Glycerol(pH 7.4 @ 25°C)。

          熱失活:65℃10min。

          NEB T4 DNA連接酶(Ligase)的應用特性:

          ★ 限制性片段的克隆

          ★ 將連接體和適配器連接到鈍端DNA

          NEB T4 DNA連接酶(Ligase)使用時的注意事項:

          (1)ATP 是反應中必不ke少的輔因子。這與需要 NAD 作為輔因子的 E. coli DNA 連接酶不同。

          (2)若需稀釋 T4 DNA 連接酶,推薦使用含 50% 甘油的貯存緩沖液(稀釋緩沖液 A,NEB #B8001S)稀釋,然后于 -20℃ 貯存。如稀釋后立即使用,也可以使用 1X T4 DNA 連接酶反應緩沖液稀釋。

          (3)連接反應可以在添加 1 mM ATP 的四種限制性內切酶緩沖液的任何一種或在 T4 多聚核苷酸激酶(T4 PNK)緩沖液中進行。

          (4)為方便起見,連接可在室溫(20 - 25℃)條件下進行。連接粘性末端,在 20 µl 反應體系中加入 1 µl T4 DNA 連接酶,反應 10 分鐘。連接平末端,在 20 µl 的反應體系中加入 1 µl 的 T4 DNA 連接酶,反應 2 小時;或者加入 1 µl 高濃度的 T4 DNA 連接酶反應 10 分鐘。此外,也可選擇 NEB Quick Ligation 快速連接試劑盒(#M2200S)[30 次反應] 或(#M2200L)[150 次反應]),在室溫條件下反應 5 分鐘,即可完成 DNA 平末端和粘性末端的連接。

          NEB T4 DNA連接酶(Ligase)產品訂購信息:

          產品名稱

          貨號

          儲存溫度

          數量

          濃度

          T4 DNA連接酶

          M0202VVIAL

          -20℃

          1 x 0.025 ml

          400,000 units/ml

          T4 DNA連接酶反應緩沖液

          B0202SVIAL

          -20

          1 x 1 ml

          10 X

          T4 DNA連接酶

          M0202SVIAL

          -20

          1 x 0.05 ml

          400,000 units/ml

          T4 DNA連接酶反應緩沖液

          B0202SVIAL

          -20

          1 x 1 ml

          10 X

          T4 DNA連接酶

          M0202TVIAL

          -20

          1 x 0.01 ml

          2,000,000 units/ml

          T4 DNA連接酶反應緩沖液

          B0202SVIAL

          -20

          1 x 1 ml

          10 X

          T4 DNA連接酶

          M0202LVIAL

          -20

          1 x 0.25 ml

          400,000 units/ml

          T4 DNA連接酶反應緩沖液

          B0202SVIAL

          -20

          1 x 1 ml

          10 X

          T4 DNA連接酶

          M0202MVIAL

          -20

          1 x 0.05 ml

          2,000,000 units/ml

          T4 DNA連接酶反應緩沖液

          B0202SVIAL

          -20

          1 x 1 ml

          10 X

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