蛋白Marker的分類

在WesternBlot實驗中，蛋白Marker的作用就像是參照標尺，用于目標蛋白分子量大小的確定、蛋白分離成功與否的判斷等。因此，選擇合適的蛋白Marker，對實驗來說至關重要，那你知道蛋白Marker的分類是如何劃分的嗎？讓我們一起來看看吧！一、非預染蛋白Marker非預染蛋白Marker是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預混液，方便不同大小的蛋白比較。其條帶在結合染料時，分子量不會改變，可準確評估SDS-PAGE的蛋白樣品分子量。非預染蛋白Marker在電泳過程中看不到，...

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細胞復蘇的小Tips

一、細胞復蘇的原理細胞復蘇的原理是基于將細胞從液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢復活力的技術。遵循“快融”原則，短時間內(nèi)融化胞外結晶，避免緩慢融化導致水分滲入胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶損傷細胞，融化越快，細胞損傷越小。二、細胞復蘇的小Tips1.為防止凍存管在水浴鍋中升溫時突然爆炸，可以在放入水浴鍋前先在生物安全柜中把蓋子擰松一下然后再擰上。2.從液氮罐里拿出細胞不必急于放入水浴鍋中，因為細胞從液氮的-196℃上升到-80℃這個過程對細胞是沒有損害的，我們有足夠的時間處理。但是，一...

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免疫組化（IHC）SP法，原來如此簡單！

免疫組化，是應用免疫學基本原理-抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學技術或免疫細胞化學技術。一、SP法步驟1.SP三步法脫蠟→梯度水化→滅活內(nèi)源性過氧化物酶→抗原修復→封閉→一抗孵育→二抗孵育→SP反應→DAB顯色→蘇木素復染→常規(guī)脫水→透明→封片2、免疫組化的關鍵環(huán)節(jié)①脫蠟和水化②抗原修復③滅活內(nèi)源性過氧化物酶和...

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WB-考馬斯亮藍染色法

一、考馬斯亮藍結構考馬斯亮藍R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的兩種化學形式，結構上R-250比G-250少了2個甲基。二、蛋白質(zhì)染料要求用染料和生物大分子結合形成有色的復合物是電泳后檢測常用的方法。選用染料通常應考慮以下要求：1.必須與大分子結合以形成一個不溶性的，有色的，緊密的復合物，但不結合到凝膠中和支持膜上，以便從凝膠中除去，否則高背景會影響蛋白帶的辨別和定量掃描。2.染料必須容易溶解在對大分子沒有影響的溶劑中，以利于背景的脫色。3.選用高吸光系數(shù)的...

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細胞凍存的小Tips

細胞凍存是細胞培養(yǎng)中的關鍵環(huán)節(jié)，直接影響細胞存活率和活力，關系到后續(xù)細胞實驗能否按照計劃有效地進行。掌握好細胞凍存的小Tips，有助您做好細胞培養(yǎng)式樣，讓我們一起來看看吧！一、細胞凍存的基本原則細胞凍存遵循“慢凍”原則：讓細胞在超低溫環(huán)境中緩慢進入“冬眠”狀態(tài)，暫時停止其代謝活動。目的是保存細胞樣本，方便復蘇。二、細胞凍存的注意事項1.溫度控制不穩(wěn)定可能導致細胞存活率降低二甲基亞砜（DMSO）或甘油常作為冷凍保護劑，保護細胞。DMSO能快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點，延緩凍...

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