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CRISPR-Cas9 是近年興起的用于靶向基因組特定位置，進(jìn)行DNA修飾的重要工具。研究發(fā)現(xiàn)CRISPR是細(xì)菌為了應(yīng)對(duì)病毒的攻擊而演化而來的獲得性免疫防御機(jī)制。具體來說，在CRISPR和Cas9的作用下，經(jīng)由小RNA分子的引導(dǎo)，靶向并沉默入侵者遺傳物質(zhì)核酸的關(guān)鍵部分。在該系統(tǒng)中，crRNA（CRISPR-derived RNA）與tracrRNA（trans-activating RNA）結(jié)合形成的復(fù)合物能特異性識(shí)別靶基因序列，并引導(dǎo)Cas9核酸內(nèi)切酶在靶定位點(diǎn)剪切雙鏈DNA，隨后，細(xì)胞的非同源末端連接修復(fù)機(jī)制（NHEJ）重新連接斷裂處的基因組DNA，并引入插入或缺失突變。另外也可以提供一個(gè)外源雙鏈DNA供體片段（Donor）通過同源重組（HR）整合進(jìn)斷裂處的基因組，從而達(dá)到對(duì)基因組DNA進(jìn)行修飾的目的。
目前，CRISPR-Cas9系統(tǒng)的基因組編輯功能已被應(yīng)用于多種生物，包括小鼠、大鼠、斑馬魚、秀麗隱桿線蟲，也包含多種細(xì)菌和植物，甚在人體上也有應(yīng)用。
基因編輯與RNA干擾的區(qū)別
方法 | 靶標(biāo) | 質(zhì)粒構(gòu)建 | 基因表達(dá) | 基因敲除 | 基因定點(diǎn)突變 | 基因組改變 | 遺傳密碼子改變 | 遺傳性 |
RNAi | mRNA （轉(zhuǎn)錄水平） | 簡(jiǎn)單 | 下調(diào) | 否 | 否 | 否 | 否 | 可借助病毒實(shí)現(xiàn) |
CRISPR-CAS9 | DNA序列（基因組水平） | 簡(jiǎn)單 | 敲除 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
TALEN | DNA序列（基因組水平） | 復(fù)雜 | 敲除 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
基因編輯技術(shù)優(yōu)勢(shì)
1、操作簡(jiǎn)單，靶向性高。
2、可實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因特定位點(diǎn)定點(diǎn)敲除。
3、可同時(shí)對(duì)多個(gè)靶基因進(jìn)行敲除。
4、可應(yīng)用于任何物種。
5、CRISPR-Cas9系統(tǒng)是由RNA調(diào)控的對(duì)DNA的修飾，可穩(wěn)定遺傳。
服務(wù)項(xiàng)目
普通載體、Cas9/Donor腺病毒顆粒、Cas9慢病毒顆粒
定制gRNA和HR供體載體
基因敲除細(xì)胞株
Gene Knock-Out，Knock-in或Gene標(biāo)記
客戶需要提供材料
1、物種、基因名稱或者基因ID；
2、提供靶細(xì)胞。
服務(wù)流程
1、提交項(xiàng)目課題相關(guān)需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論項(xiàng)目細(xì)節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行修改。
4、雙方均滿意并達(dá)成一致，簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
5、開展實(shí)驗(yàn)，按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結(jié)題，提供實(shí)驗(yàn)原始結(jié)果和分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)流程、實(shí)驗(yàn)條件等等。
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