流式細(xì)胞術(shù)的測定對象是單細(xì)胞或單個微粒，在FCM技術(shù)中能夠制備出合格的單細(xì)胞懸液是非常重要的環(huán)節(jié)，單細(xì)胞懸液來自于動植物的不同組織器官，也可來自于非生物樣品，F(xiàn)CM中大多數(shù)為生物樣品，生物樣品主要來源于培養(yǎng)細(xì)胞、血液、新鮮實(shí)體組織以及石蠟包埋組織等，不同的組織有不同的單細(xì)胞分散方法，因此建立切實(shí)可行的FCM單細(xì)胞懸液的具體制備方法，在流式細(xì)胞分析中至關(guān)重要。那么你知道流式細(xì)胞術(shù)的樣品制備方法都有什么嗎？讓我們一起來看看吧！
一、酶消化法
酶的作用原理主要有三方面：一是破壞組織間的膠原纖維、彈性纖維等，二是水解組織細(xì)胞的緊密連接結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，三是水解組織間的粘多糖物質(zhì)。酶消化法是實(shí)體組織分散為單細(xì)胞的主要方法之一。
二、機(jī)械法
機(jī)械法分散實(shí)體組織包括:用剪刀剪碎組織或用鋒利的解剖刀剁碎組織，用勻漿器勻漿，用細(xì)注射針頭反復(fù)抽吸細(xì)胞等，最后用300目尼龍網(wǎng)過濾細(xì)胞得到單細(xì)胞懸液。
三、化學(xué)處理法
化學(xué)處理法的主要原理是:將組織細(xì)胞間起粘連作用的鈣、鎂離子置換出來，從而使細(xì)胞分散下來。
四、注意事項：
1. 需要注意的是酶學(xué)方法的使用條件和影響因素(如酶濃度、酶效價、作用時間、pH值)等，例如胃蛋白酶在堿性環(huán)境下失去活性、胰酶在中性溶液中活性欠佳。
2. 采用網(wǎng)搓法同樣也可獲得大量細(xì)胞，但機(jī)械法容易造成細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)快，因此常與其他方法配合使用。
3. 新鮮組織標(biāo)本應(yīng)及時處理保存，避免細(xì)胞自溶導(dǎo)致DNA降解。
4. 根據(jù)實(shí)驗?zāi)康倪x擇最佳固定方式;如采用酶學(xué)法需注意酶的溶劑、消化時間、pH值、濃度等，同時根據(jù)組織成分合理選用酶類，例如含大量結(jié)締組織腫瘤，如食管癌、乳腺癌、皮膚癌等應(yīng)選擇膠原酶。
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