細(xì)胞消化的方法有什么
在貼壁細(xì)胞傳代前必需將細(xì)胞與貼附介質(zhì)分離，常見(jiàn)的方式就是通過(guò)胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化。那么你知道細(xì)胞消化的方法有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧!
一、機(jī)械消化法
直接用液體吹打或用刮刀，施予外力讓細(xì)胞與培養(yǎng)底物分離；適用于貼壁性弱的細(xì)胞傳代，但相較于其它消化方法，這種外力無(wú)法量化控制，細(xì)胞分散效果差，且可能會(huì)造成大量細(xì)胞破損，使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基，進(jìn)而影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。
二、離子螯合法
細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來(lái)維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié)，當(dāng)然也包含各種黏附蛋白（例：整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等），螯合劑會(huì)在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下，抽離這些離子，使黏附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用，讓細(xì)胞較容易在施予外力時(shí)，脫離培養(yǎng)底物并促進(jìn)細(xì)胞分散。
0.02%EDTA是細(xì)胞傳代常用的離子螯合劑，在37℃作用效果佳（消化較敏感的細(xì)胞可在4℃作用），適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。但EDTA無(wú)法用血清終止其反應(yīng)，所以在消化細(xì)胞后必須用緩沖鹽溶液（如：PBS）清洗離心，以免影響后續(xù)細(xì)胞貼盤(pán)效果。
三、酶消化法
用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì)，適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。
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