如何區(qū)分各種PCR技術

　　如何區(qū)分各種PCR技術？

　　PCR是聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction）的簡稱，是一種體外擴增特定DNA片段的分子生物學技術，PCR技術有很多，那么我們該如何區(qū)分各種PCR技術呢？讓我們一起來看看吧！

　　一、普通PCR

　　普通PCR即一代PCR，使用普通PCR擴增儀擴增靶基因，并通過瓊脂糖凝膠電泳對產物進行定性分析。

　　二、實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qPCR）

　　實時熒光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR擴增反應體系中加入熒光染料或者熒光基團，在整個PCR過程中通過收集熒光信號實時監(jiān)測每一個循環(huán)中擴增產物量的變化，最后通過標準曲線和CT值對待測樣品進行定量分析。qPCR常用的有兩種方法：SYBR Green法和TaqMan探針法。

　　三、數(shù)字PCR

　　數(shù)字PCR即三代PCR，是對原始PCR的另一種改進，是一種能夠實現(xiàn)核酸絕對定量的精準檢測技術，基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨立、平行的微反應單元（納升級）中，使每個反應室中平均只有一個拷貝或者沒有目標DNA分子，然后加入熒光信號進行擴增，從而實現(xiàn)靶標核酸分子的絕對計數(shù)，提高檢測靈敏度和準確度。

　　四、逆轉錄PCR（Reverse T ranscription-PCR,RT-PCR）

　　逆轉錄PCR也叫反轉錄PCR，將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增相結合，是PCR的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中首先經反轉錄酶將一條單鏈RNA逆轉錄成cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA，關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。RT-PCR技術靈敏且應用廣泛，可用于檢測細胞中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。一般通過一步法或兩步法進行，一步法是RT反應和PCR反應在同一試管中進行；而在兩步法中兩個反應是分開依次進行的。

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