Elabscience Caspase 2活性檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理與注意事項(xiàng)

Elabscience Caspase 2活性檢測(cè)試劑盒采用分光光度法，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織裂解液或其它樣本的 caspase 2 活性。那么你知道Elabscience Caspase 2活性檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理與注意事項(xiàng)是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

Caspase 2 也稱 Ich-1 (ICE and CED-3 homolog 1)或 Nedd-2，在細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中可以被激活。Caspase 2 mRNA可以被剪切成兩種不同長(zhǎng)短的形式。Caspase 2 全長(zhǎng)的 mRNA產(chǎn)物可以促進(jìn)凋亡，而短的 mRNA 的蛋白產(chǎn)物則可以抑制細(xì)胞凋亡。在體外，Caspase 2 可以被 caspase 1、caspase 3 和granzyme B 激活。

一、檢測(cè)原理

本caspase2活性檢測(cè)試劑盒是基于caspase2可以催化底物Ac-VDQQD-pNA 產(chǎn)生黃色的 pNA(p-nitroaniline)，pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收，從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)caspase 2 的活性。

二、注意事項(xiàng)

1. 所有待檢樣本都需檢測(cè)蛋白濃度，由于樣本裂解液中含有還原劑，不適合使用 BCA 法進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定，推薦使用考馬斯亮藍(lán)法（Bradford 法）。

2. 建議在正式實(shí)驗(yàn)前，選擇2~3個(gè)預(yù)期差異大的樣本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若樣本吸光值超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)量范圍，則需稀釋樣本或者調(diào)整上樣量再進(jìn)行測(cè)定。

3. 進(jìn)行caspase 2活性測(cè)定的樣本，其蛋白濃度應(yīng)在1~4 mg/mL，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 一次實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞數(shù)目建議不低于1×10⁶個(gè)，組織樣本不低于50mg，以便達(dá)到1~4 mg/mL的蛋白濃度。否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的精準(zhǔn)度，導(dǎo)致蛋白濃度過(guò)低，反應(yīng)體系內(nèi)活性caspase 2過(guò)少而OD值偏低。

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