親和層析介質(zhì)純干貨分享

  親和層析（Affinity chromatography）是一種根據(jù)生物分子與其他配基分子之間特異性結(jié)合的原理來分離物質(zhì)的層析方法。通過配基與目標(biāo)分子之間的可逆結(jié)合來實(shí)現(xiàn)純化目標(biāo)分子的目的。親和層析具有高選擇性，而且能有效地保持生物大分子高級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，同時(shí)還具有對(duì)活性樣品高回收率的特點(diǎn)，是當(dāng)前最為理想的分離純化蛋白的方法。

親和層析原理

常用的生物親和關(guān)系有：

親和層析介質(zhì)是在交聯(lián)瓊脂糖上連接不同親和配基構(gòu)成的介質(zhì)，由基質(zhì)、配基和間隔臂三個(gè)部分組成。親和層析介質(zhì)按配基不同又可分為多種類型，比如Protein A和Protein G親和層析介質(zhì)，GST親和層析介質(zhì)，IMAC（金屬螯合介質(zhì)）親和層析，Heparin（肝素）親和層析介質(zhì)等。

親和層析介質(zhì)結(jié)構(gòu)

對(duì)于IgG的純化，大部分情況下會(huì)選擇使用Protein A或Protein G進(jìn)行親和層析。因?yàn)樗鼈儗?duì)于IgG的Fc段具有特異性的親和作用。

其中Protein A是從金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁分離的蛋白質(zhì)，可特異性與人或哺乳動(dòng)物抗體（主要是IgG）的Fc區(qū)域結(jié)合，主要結(jié)合亞類為IgG1、IgG2和IgG4。分為天然Protein A和重組Protein A。重組Protein A更耐堿性，且耐受蛋白酶。

Protein G是從G類鏈球菌中分離出來的胞壁蛋白。相對(duì)于Protein A，Protein G對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG有著更高的親和力，尤其是對(duì)于IgG的亞基，如人IgG3，小鼠IgG1和IgG2a。因此，Protein G可用于純化不能與Protein A很好結(jié)合的哺乳動(dòng)物單抗和多抗IgG。

   GST親和層析介質(zhì)是一種用于快速純化谷胱甘肽s -轉(zhuǎn)移酶(GST)標(biāo)記蛋白、其他谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶以及與谷胱甘肽有親和作用的蛋白質(zhì)的分離介質(zhì)，可以快速純化細(xì)菌、酵母、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物中表達(dá)的GST標(biāo)記蛋白。

IMAC親和層析介質(zhì)是基于某些過渡金屬離子（主要是Ni²⁺、Zn²⁺和Co²⁺）與含有組氨酸（或半胱氨酸和色氨酸）的暴露氨基酸表面鏈之間的特定相互作用。IMAC用于純化在細(xì)菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的帶組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白，還可用于純化某些天然的非標(biāo)記蛋白質(zhì)，例如干擾素、凝集素、抗體、血清和血漿蛋白、肽和肽激素。

Heparin親和層析介質(zhì)用于純化對(duì)肝素有親和力的生物分子，如抗凝血酶III、凝血因子和其他血漿蛋白、DNA 結(jié)合蛋白、脂蛋白、蛋白質(zhì)合成因子、作用于核酸的酶和類固醇受體等。

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