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          抗體的“存“和“取“

           更新時間:2022-05-16 點擊量:1850

          一、抗體的簡介
          抗體是一些淋巴細胞直接抵抗外來分子所產(chǎn)生的蛋白質(zhì),它們是免疫系統(tǒng)的重要組成成分,是實驗室的重要工具。抗體有兩個成員:多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體是用抗原注射動物產(chǎn)生的,針對相同蛋白質(zhì)的不同抗原決定簇直接產(chǎn)生的各種不同親和性的多種免疫球蛋白的混合物。單克隆抗體是在體外制備的,是免疫淋巴瘤細胞與分泌抗體的漿細胞融合后產(chǎn)生的,整個培養(yǎng)只產(chǎn)生一種抗體(常是IgG) ,直接抵抗外來物。
          二、抗體的作用

          抗體可以用放射性元素或者酶來標記,可以讓它們所識別的蛋白質(zhì)變成可見的或者是可以定量的。
          1)染色細胞:標記抗體可以用來定位細胞蛋白質(zhì)。
          2)免疫沉淀:抗體可以用來檢測抗原是否存在以及其功能。

          表一  免疫化學技術、多克隆抗體和單克隆抗體

          技術

          多克隆抗體

          單克隆抗體

          共聚單克隆抗體

          細胞染色
          免疫共沉淀
          免疫印跡
          免疫親和純化

          一般好
          一般好
          一般好

          抗體依賴
          抗體依賴
          抗體依賴
          抗體依賴

          很好
          很好
          很好

          免疫方法




          標記抗體
          標記抗原

          困難
          一般好


          抗體依賴

          很好
          很好

          3)免疫印跡:就是我們所知道的免疫印跡法,蛋白質(zhì)是否存在以及數(shù)量都可以在濾膜上通過樣品的免疫來檢測出。
          4)免疫親和:抗體所針對的蛋白質(zhì)可以直接被分離和純化。
          三、抗體的貯藏

          1)抗體最好貯藏在-20℃分裝,凍融對于大多數(shù)抗體都不好。

          2)分裝好的抗體可以在4℃保存至少6個月。

          3)加上疊氮鈉至終濃度0.02%來阻止細菌的生長。

          四、注意事項

          1)要知道你的抗體是由什么動物產(chǎn)生的,方便后續(xù)決定用什么樣的二抗。多克隆抗體通常用兔或者猴子,單克隆抗體通常用小鼠、大鼠和倉鼠。
          2)使用前離心去除所有的沉淀,在一些操作中可以阻止高背景。
          3)A蛋白,從S. aureus 細胞壁中分離到的42 kDa的多肽;G 蛋白,從β溶血鏈球菌中分離到的30-35 kDa 的多肽,都與抗體有強烈的結合,它們被用來免疫沉淀或者定位抗體。A蛋自和G蛋白都可以用來與珠子結合或者標記,適用于大部分的抗體亞類。

           


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